前面我們在文章《為什么CCK8鏡下趨勢是對的，測出來的OD值卻不對？？》中cue到過CCK8實驗，那么CCK8具體到底是什么呢，讓我們今天一起詳細了解下吧~

一、CCK-8實驗的基本定義與原理

CCK-8實驗是一種廣泛應(yīng)用于細胞生物學(xué)研究的細胞增殖和毒性檢測方法。其基本原理在于利用細胞內(nèi)的代謝酶將無色的CCK-8試劑（Cell Counting Kit-8）中的WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽）還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚染料（Formazan dye）。這一過程依賴于細胞內(nèi)的脫氫酶，且生成的甲瓚染料數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此，通過測量甲瓚染料的吸光度，可以間接反映細胞的活力和增殖能力。

二、CCK-8實驗的應(yīng)用領(lǐng)域

1、細胞增殖測定；

2、藥物篩選；

3細胞毒性測定；

4腫瘤藥敏實驗；

5、微生物對細胞的毒性或增殖的實驗。

三、CCK-8實驗的具體操作步驟

CCK-8實驗的具體操作步驟包括：

實驗前準備：將生長狀態(tài)良好的細胞進行消化、離心和計數(shù)，然后均勻鋪到96孔板中，每組設(shè)置多個平行孔。同時，在邊緣孔中加入PBS以減少培養(yǎng)基的蒸發(fā)。

CCK-8處理：待細胞貼壁后，棄掉原有培養(yǎng)基，加入含有終體積1/10 CCK-8溶液的wan全培養(yǎng)基。然后在37℃、5% CO2、90%濕度的條件下孵育1-4小時。

吸光度測定：使用酶標儀在450nm處測定各孔的吸光度值。

計算結(jié)果：根據(jù)吸光度值計算細胞的存活率或增殖率。常用的計算公式為：細胞活力*(%)=[A(加藥)—A(空白)]/[A(0加藥)—A(空白)] ×100。

CCK-8實驗的結(jié)果分析與解讀

CCK-8實驗的結(jié)果分析主要依賴于對吸光度值的測量和計算。通過比較不同處理組的吸光度值，可以評估不同藥物或處理條件對細胞活力的影響。例如，在藥物篩選實驗中，可以通過計算細胞的存活率或增殖率來判斷藥物的毒性或有效性。此外，還可以通過繪制細胞生長曲線來直觀地展示細胞在不同條件下的生長情況。、

四、CCK-8實驗的注意事項與常見問題

在進行CCK-8實驗時，需要注意以下幾點：

細胞接種密度要適中：細胞密度過高或過低都可能影響實驗結(jié)果的準確性。

CCK-8試劑添加量要適量：過多或過少的CCK-8試劑都可能影響吸光度值的測量。

培養(yǎng)時間要適當：過長的培養(yǎng)時間可能導(dǎo)致細胞死亡或過度增殖，從而影響實驗結(jié)果。

測定吸光度時要確保酶標儀校準準確：酶標儀的校準準確性直接影響吸光度值的測量結(jié)果。

五、CCK-8實驗優(yōu)缺點

優(yōu)點：

1、靈敏度高；2、操作簡便；3、可重復(fù)性好；4、對細胞毒性小

缺點：

1、受細胞種類和狀態(tài)的影響：不同細胞類型和狀態(tài)對CCK8試劑的敏感度和特異性不同，需根據(jù)具體實驗情況進行調(diào)整。

2、依賴細胞還原能力：會受到氧化還原狀態(tài)、營養(yǎng)狀況等因素的影響。

3、無法分辨細胞增殖和代謝的貢獻

六、CCK-8實驗在科研中的重要意義

CCK-8實驗在科研中具有重要意義。它不僅可以用于細胞增殖和毒性分析，還可以應(yīng)用于藥物篩選、腫瘤藥敏試驗以及微生物對細胞毒性或增殖的測定等多個方面。通過CCK-8實驗，研究人員可以更加準確地評估藥物的療效和毒性，為藥物研發(fā)提供有力支持。同時，CCK-8實驗還可以幫助研究人員深入了解細胞的生物學(xué)特性，為疾病診斷和治療提供新的思路和方法。

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