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瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染常見誤區(qū)

 更新時間:2024-11-12    點擊量:181
  誤區(qū)一:穩(wěn)定轉(zhuǎn)染目的基因會整合到染色體,瞬時轉(zhuǎn)染不會
 
  這個答案是否定的,因為無論是瞬時轉(zhuǎn)染還是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,DNA都會被引入細胞核并以一定的概率隨機地整合到宿主染色體;差別在于,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染所使用的質(zhì)粒含有抗性基因,隨后通過藥物篩選,將未轉(zhuǎn)入目的基因的細胞消除,留下的則是成功轉(zhuǎn)入目的基因的細胞,因此經(jīng)過一段時間的藥物篩選,留存下來的細胞都是能夠穩(wěn)定傳遞的細胞,稱之為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染;而瞬時轉(zhuǎn)染由于缺乏藥物壓力篩選,再加上只有少量細胞中有目的基因整合到染色體,因此在傳代過程中,陽性細胞會逐漸減少,導致表達量逐漸降低,最終無法長期穩(wěn)定表達。
 
  誤區(qū)二:只有慢病毒感染才能構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株
 
  可以用來進行快速轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染方法,同樣適用于構(gòu)建穩(wěn)定的細胞株,例如電穿孔法、化學試劑轉(zhuǎn)染和慢病毒感染等。只是這三種轉(zhuǎn)染方法在具體應(yīng)用上可能會有一些差異。需要特別注意的是,在進行RNA轉(zhuǎn)染時,由于RNA不需要進入細胞核,因此通常只用于短期轉(zhuǎn)染表達。
 
  誤區(qū)三:構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株費時費力,周期長,不確定性高,常規(guī)實驗室不方便構(gòu)建
 
  細胞株構(gòu)建需要通過藥物加壓篩選,與瞬轉(zhuǎn)相比周期長,但在進行科學研究時,確定了一個長期研究的靶標,后續(xù)都會針對某一基因進行相關(guān)實驗,那么這個時候構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株就顯得尤為必要,畢竟細胞株相較于瞬轉(zhuǎn)來說,最大的優(yōu)點就是表達穩(wěn)定性高,批間差異小,實驗結(jié)果可靠性更高。
 
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